Mario Tennis Open — представлены 24 игровых персонажа Марио, 4 из которых открываются путем выполнения определенных задач, а еще восемь открываются путем сканирования определенных QR-кодов. Каждый персонаж обладает заранее определенным навыком, например преимуществом в скорости, нападении или защите. Также можно выбирать образы Mii, сохраненные в программе Nintendo 3DS Mii Maker. В отличие от персонажей Марио, навыки персонажей Mii различаются и настраиваются в зависимости от теннисной экипировки, которую экипирует игрок. Варианты снаряжения приобретаются за монеты, которые начисляются после игры в каждом игровом режиме. Тем не менее, костюмы можно получить, выполнив определенные задания.